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参数
应用
1. 时间分辨荧光光谱/显微镜（FLIM、FRET、FCS） 2. 受激发射耗减显微镜（STED） 3. 生化分析 4. 弥散光学断层扫描（DOT） 5. 量子光学 6. 激光雷达、测距 7. 3D聚合
特征
1. 支持多种波长：266nm至1532nm 2. 脉冲宽度低至70ps 3. 平均输出功率范围广：1mW至450mW 4. 重复频率高达80MHz 5. 输出形式多样：准直光束或偏振保持光纤输出
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金属纳米粒子被证实会影响荧光团对之间的福斯特能量转移（FRET）。然而迄今为止，等离子体效应对FRET的净影响仍存在争议——实验中既观察到效率增强现象，也发现效率降低的情况。这种争议源于两个技术难点：一是难以将FRET对精确定位于金属纳米结构的近场区域，二是难以准确表征等离子体效应对FRET机制的影响。本研究采用DNA折纸术将FRET对定位在距离5-20纳米金纳米粒子表面10纳米处。该构型下荧光团仅受到中等程度的等离子体猝灭作用。我们通过受体漂白法，仅基于供体寿命就测定了固定化单FRET对的FRET速率常数和效率。该技术既不需要后验校正因子，也不依赖受体量子产率的先验知识，更重要的是仅需单光谱通道即可完成测定。结果表明：尽管供体和受体均经历了等离子体辅助的珀塞尔增强效应，但本实验所用金纳米粒子对FRET速率的影响可忽略不计，最终导致能量转移效率降低。
查看全文 >由直径67-193纳米银纳米颗粒通过种子生长法合成的均质银胶体薄膜（SCFs）被用作金属增强荧光（MEF）的基底。该薄膜具有均匀的粒子分布特性，在探索MEF机制方面展现出显著优势。通过时间分辨荧光光谱技术，观测到分散于聚苯乙烯（PS）薄层中的4-(二氰亚甲基)-2-甲基-6-(4-二甲氨基苯乙烯基)-4H-吡喃（DCM）与罗丹明700（Rh700）染料在SCFs作用下的荧光增强现象。当SCFs的表面等离子体共振带与染料发射带重叠时，DCM和Rh700的荧光增强效应更为显著。结合荧光强度/寿命测量与有限时域差分法模拟，采用改进分析方法估算了两种染料在SCFs作用下辐射与非辐射速率常数的粒径依赖性变化。
查看全文 >近期研究表明，小GTP酶KRAS相对于阴离子模型膜平面会呈现多种取向——催化结构域的三个C端螺旋或三个N端β链可能面向膜表面。这一情况进行功能调控：若为后者，膜结构会遮蔽效应分子结合面。但关键问题仍悬而未决：这种膜重定向如何发生？更重要的是，在细胞内（即KRAS作为信号通路分子开关发挥作用的微环境）是否也存在该现象？本研究通过分析致癌突变体G12V-KRAS在磷脂酰胆碱/磷脂酰丝氨酸双层膜中进行的20毫秒原子级分子动力学模拟数据，首次发现KRAS柔性区域的内部构象波动会产生三种独特膜取向。随后我们利用源自幼仓鼠肾细胞的天然脂质纳米盘开展单分子荧光共振能量转移检测，证实G12V-KRAS确实存在与预测取向相对应的三种构象状态。综合结果表明：不同取向状态间能量壁垒较小，且具有信号传导能力的构象在整体分布中占主导地位。
查看全文 >1. 实验设计与方法选择：本研究采用DNA折纸术技术，将单个FRET对（ATTO532供体与ATTO647N受体）精确定位于距离单金纳米颗粒（直径5-20纳米）10纳米处，并控制分子间距离为3.4纳米。通过受体漂白法仅基于供体寿命测量提取FRET速率和效率，避免使用校正因子及预先获知的受体量子产率。利用COMSOL Multiphysics进行的电磁模拟支持实验发现。 2. 样本选择与数据来源：DNA折纸结构（70纳米×85纳米）与荧光团及纳米颗粒自组装而成。样本固定于功能化玻璃盖玻片上，逐个记录每个FRET对的单分子荧光瞬态。 3. 实验设备与材料清单：DNA折纸结构、金纳米颗粒（BBI Solutions）、ATTO532与ATTO647N荧光团、生物素化寡核苷酸、BSA-生物素、neutrAvidin、Lab-Tek腔室、氢氟酸、Tween20、磷酸钾缓冲液、氯化钠、SuperBlock封闭缓冲液、特洛克斯/特洛克斯醌溶液。设备包括：搭载Olympus IX-71倒置显微镜的自制共聚焦显微镜、532纳米与637纳米脉冲激光器（Picoquant）、AOTF滤光片、二向色镜、油浸物镜（UPLSA-PO100XO，Olympus）、压电载物台（Physik Instrumente）、针孔、滤光片、单光子计数二极管（Picoquant）、SPAD探测器、单光子计数卡（Becker&Hickl）、原子力显微镜（Nanowizard 3 ultra，JPK Instruments）、紫外-可见光谱仪（Nanodrop 2000，Thermo Scientific）。 4. 实验步骤与操作流程：通过凝胶电泳进行DNA折纸折叠与纯化。金纳米颗粒的硫醇-DNA功能化处理。样本制备包含表面清洁、BSA-生物素与neutrAvidin孵育、DNA折纸固定、纳米颗粒结合及封闭步骤。采用激光交替激发（供体与受体）的共聚焦成像记录荧光瞬态（含受体漂白步骤）。通过原子力显微镜进行结构表征。 5. 数据分析方法：从瞬态测量荧光寿命（τDA、τD、τA），通过公式E=1-τDA/τD和kET=1/τDA-1/τD计算FRET效率（E）与速率常数（kET）。电磁模拟计算Purcell因子与FRET参数，包含光谱平均及空间电场强度积分。
获取完整方案1. 实验设计与方法选择：本研究采用种子生长法合成具有可控粒径的均匀银胶体薄膜（SCFs）。利用时间分辨荧光光谱和时域有限差分（FDTD）模拟分析金属增强荧光（MEF）机制。 2. 样品选择与数据来源：合成了直径67-193纳米的银胶体纳米颗粒。将DCM和Rh700染料分散于聚苯乙烯（PS）薄膜中。样品包括用于对比的SCFs和银岛膜（SIFs）。 3. 实验设备与材料清单：硝酸银、DCM、Rh700、聚苯乙烯、聚二烯丙基二甲基氯化铵（PDDA）、盖玻片、紫外-可见分光光度计（S-3100；Scinco）、扫描电子显微镜（S-4800；日立）、时间相关单光子计数模块（PicoHarp 300；PicoQuant）、皮秒脉冲激光器（P-C-485，LDH-D-TA-560；PicoQuant）、光电倍增管探测器（PMA 192；PicoQuant）、单色仪（Cornerstone 260；Newport）、FDTD解决方案（Lumerical Solutions公司）。 4. 实验流程与操作步骤：通过将PDDA包被的盖玻片浸入银胶体溶液制备SCFs。将掺杂染料的PS薄膜旋涂于基底上。进行稳态吸收/发射光谱测试、SEM成像及时间分辨荧光测量。FDTD模拟计算电场分布。 5. 数据分析方法：采用双指数函数拟合荧光动力学曲线。使用半经验模型计算增强因子（Eex、Eem、Etot）。根据寿命和量子产率数据推导辐射与非辐射速率常数。
获取完整方案1. 实验设计与方法选择：结合原子级分子动力学（MD）模拟与单分子荧光共振能量转移（smFRET）研究G12V-KRAS的膜取向动力学。MD模拟用于预测取向，smFRET用于在天然纳米盘上验证。 2. 样本选择与数据来源：G12V-KRAS突变蛋白；MD模拟采用G12V-KRAS与POPC/POPS双层膜结合的体系；smFRET使用源自表达G12V-KRAS的幼仓鼠肾（BHK）细胞的天然纳米盘。 3. 实验设备与材料清单：Anton2超级计算机用于MD模拟；定制PicoQuant MicroTime 200荧光寿命显微镜用于smFRET；激光器（LDH-D-TA-530和LDH-D-C-640）、透镜（100倍1.4数值孔径油浸透镜）、压电平台（P-733.2CD）、二向色分束器（Zt532/640rpc-UF3）、发射滤光片（FF01-582/64和2XH690/70）、单光子雪崩光电二极管（SPCM CD3516H）；染料（Alexa Fluor 555和Alexa Fluor 647马来酰亚胺）；软件（Origin、MATLAB、Excel）；细胞（BHK细胞）；试剂（SMA共聚物、脱氧核糖核酸酶、苯甲基磺酰氟、PD-10脱盐柱）。 4. 实验流程与操作步骤：MD部分：在Anton2上使用CHARMM36m力场进行20毫秒模拟，通过反应坐标z和Q分析轨迹。smFRET部分：用SMA在天然纳米盘中表达并提取G12V-KRAS，标记染料后固定于玻璃表面，采用脉冲交错激发测量FRET效率，通过STaSI方法分析数据。 5. 数据分析方法：MD部分：通过分析z和CosQ确定取向状态。smFRET部分：采用STaSI分析确定FRET状态，使用阿伦尼乌斯方程计算自由能和能垒，统计分析借助Origin、MATLAB和Excel完成。
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电话
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