研究目的
结合基于培养的群体水平检测与单细胞分辨率微流控显微系统，研究耻垢分枝杆菌青霉素结合蛋白（PBP）突变体对异烟肼的反应。
研究成果
该研究发现，在批次培养中耻垢分枝杆菌PBP突变体表现出显著的异烟肼杀菌表型，但单细胞分析却显示与野生型相比，其细胞裂解减少且完整细胞比例更高，这一矛盾结果凸显了结合群体水平与单细胞检测对于全面理解抗生素应答及细菌异质性的重要性，同时强调需要先进工具来应对抗生素耐药性。
研究不足
基于传统文化的检测方法不足以提供关于活但不可培养细胞亚群的见解。该研究强调了需要更合适的工具来理解和对抗抗生素耐药性，指出了当前方法在捕捉细菌异质性和动态反应方面的局限性。
1：实验设计与方法选择：
结合群体水平基于培养的检测与单细胞分辨率微流控显微镜系统，研究耻垢分枝杆菌PBP突变体对异烟肼的反应。方法包括批次培养检测、微流控芯片活细胞成像及图像分析。
2：样本选择与数据来源：
使用耻垢分枝杆菌野生型及msm0031转座子突变株细胞。细胞在标准Middlebrook 7H9培养基中培养。从突变体提取基因组DNA进行鉴定。
3：实验设备与材料清单：
含PDMS通道的微流控芯片、半透膜、盖玻片、注射泵、硅胶管、倒置自动延时荧光显微镜（奥林巴斯IX75）、滨松ORCA-AG CCD相机、100×油镜、温控腔室、分光光度计（赛默飞世尔Biomate 5）、琼脂平板、抗生素（异烟肼、利福平、乙硫异烟胺、乙胺丁醇）、应激试剂（SDS、酸性pH、热应激、PBS）、酶（BamHI、T4连接酶）及试剂（溶菌酶、蛋白酶K、西曲溴铵盐水、氯仿）。
4：5）、滨松ORCA-AG CCD相机、100×油镜、温控腔室、分光光度计（赛默飞世尔Biomate 5）、琼脂平板、抗生素（异烟肼、利福平、乙硫异烟胺、乙胺丁醇）、应激试剂（SDS、酸性pH、热应激、PBS）、酶（BamHI、T4连接酶）及试剂（溶菌酶、蛋白酶K、西曲溴铵盐水、氯仿）。 实验流程与操作步骤：
4. 实验流程与操作步骤：通过批次培养进行生长及应激反应检测。微流控芯片用于持续介质流（25µL/分钟）下的活细胞成像。芯片实验包括抗生素前生长、抗生素暴露（72小时）及抗生素后恢复阶段。采用相位差与荧光通道获取图像，使用ImageJ细胞计数插件手动分析图像。
5：数据分析方法：
统计分析采用双尾Student非配对t检验，p值<0.05视为显著。使用三次独立实验数据。计算药物特异性分数存活率（FSR）。从延时影像量化细胞裂解与分裂事件。
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