β-环糊精对香豆素314的异常荧光猝灭及其对与小牛胸腺DNA结合的影响

1：实验设计与方法选择：

本研究采用紫外-可见光谱、二维ROESY核磁共振、稳态及时间分辨荧光光谱和分子建模技术，探究香豆素314与β-环糊精和小牛胸腺DNA的结合情况。理论模型包括用于计算结合常数的Benesi-Hildebrand方程和Stern-Volmer方程。

2：样本选择与数据来源：

香豆素314、β-环糊精和小牛胸腺DNA分别购自Sigma-Aldrich、Hi Media和Genei（默克）。溶液以甲醇和水为溶剂配制，用磷酸、氢氧化钠和硫酸调节pH值。

3：β-环糊精和小牛胸腺DNA分别购自Sigma-Aldrich、Hi Media和Genei（默克）。溶液以甲醇和水为溶剂配制，用磷酸、氢氧化钠和硫酸调节pH值。 实验仪器与材料清单：

3. 实验仪器与材料清单：仪器包括Jasco-V630紫外-可见分光光度计、珀金埃尔默LS55荧光分光光度计、时间相关单光子计数荧光光谱仪（钛宝石激光器-光谱物理；Jobin-Vyon）、PCI 9L 250H超声波清洗器、Elico LI 120 pH计和布鲁克AV III核磁共振波谱仪。所用软件为Glide 5.5（薛定谔）和RasMol 2.7.5.2版。

4：5（薛定谔）和RasMol 2版。 实验步骤与操作流程：

4. 实验步骤与操作流程：通过超声处理和重结晶法制备固体C314-β-CD复合物。测试溶液经稀释配制，以空白对照测定吸收和荧光光谱。滴定实验改变β-CD或ctDNA浓度，在25±2°C下测量。pH研究使用不同pH值溶液，二维ROESY在[D6]DMSO中完成。

5：数据分析方法：

数据分析包括绘制线性图（如Benesi-Hildebrand、Stern-Volmer）计算结合常数、利用吸光度和荧光数据计算pKa值，以及通过分子建模实现相互作用可视化。