研究目的
开发一种多模态超分辨率成像新概念,将SOFI的累积量分析与三维、光谱或其他信息印刻到PSF图案中相结合,从而实现从单幅图像平面编码和提取多维信息。
研究成果
stSOFI概念成功地将SOFI累积量分析与PSF编码相结合,实现了三维超分辨率成像(以量子点为示范)。该方法无需焦平面扫描即可提供光学切片和分辨率增强功能,并有望推广至光谱成像等其他模态。未来工作应优化波前整形器并拓展至高阶累积量分析。
研究不足
光学切片能力取决于比值a/σ(瓣间距与瓣直径之比),当该值低于约0.22时会出现性能下降。在极端方位角下PSF图案的形变会导致角度测定出现系统性偏差。动态范围h限制了轴向分辨率和成像深度,需要在分辨率与成像深度之间进行权衡。
1:实验设计与方法选择:
本研究采用时空关联SOFI(stSOFI)技术,将SOFI的时间累积量分析与螺旋波前整形技术相结合,后者通过将轴向位置编码至点扩散函数(PSF)图案中实现。理论模型涉及计算与PSF瓣间距相对应的位移矢量的时空关联性。
2:样本选择与数据来源:
荧光量子点(QDs)通过旋涂法沉积于盖玻片上的聚乙烯醇(PVA)薄膜中,形成具有随机闪烁特性的稀疏三维发射体分布。
3:实验设备与材料清单:
宽场落射荧光显微镜(IX83,奥林巴斯)、488纳米激光器(Cobalt Jive)、100倍1.3数值孔径油浸物镜(UPLFLN-2 O,奥林巴斯)、二向色镜(zt 488 RDC,AHF)、双螺旋SPINDLE模块(Double Helix Optics)、带通发射滤光片(BP 617/73 Brightline HC,AHF)、EMCCD相机(Andor iXon Ultra 897)、量子点(Qdot 625 ITK羧基量子点,赛默飞世尔科技)、聚乙烯醇(PVA)。
4:3数值孔径油浸物镜(UPLFLN-2 O,奥林巴斯)、二向色镜(zt 488 RDC,AHF)、双螺旋SPINDLE模块(Double Helix Optics)、带通发射滤光片(BP 617/73 Brightline HC,AHF)、EMCCD相机(Andor iXon Ultra 897)、量子点(Qdot 625 ITK羧基量子点,赛默飞世尔科技)、聚乙烯醇(PVA)。 实验流程与操作步骤:
4. 实验流程与操作步骤:以30毫秒帧间隔记录样本动态影像,对原始图像进行亚像素位移插值处理。基于PSF图案推导的取向角和距离参数,采用离散位移矢量执行时空关联分析。
5:数据分析方法:
通过公式(5)计算stSOFI图像,拟合哑铃状结构取向,并与stSOFI强度的加权平均值进行对比。采用傅里叶空间上采样技术实现图像插值。
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Microscope
IX83
Olympus
Wide-field epi-fluorescence imaging for sample observation and data acquisition.
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Objective
UPLFLN-2 O
Olympus
100× magnification oil immersion objective for high-resolution imaging.
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EMCCD Camera
ixon Ultra 897
Andor
Records time-lapse movies of fluorescence images with high sensitivity.
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Quantum Dots
Qdot 625 ITK Carboxyl
Thermo Fisher Scientific
Fluorescent labels with stochastic blinking for SOFI analysis.
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Laser
Cobalt Jive
Cobalt
Provides 488 nm excitation light for fluorescence stimulation.
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Dichroic Mirror
zt 488 RDC
AHF
Reflects excitation laser light and transmits fluorescence emission to the detector.
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SPINDLE Module
Double Helix SPINDLE
Double Helix Optics
Converts standard PSF into dumbbell pattern for encoding axial position via wavefront shaping.
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Emission Filter
BP 617/73 Brightline HC
AHF
Band pass filter to select fluorescence emission around 617 nm.
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Poly(vinyl alcohol)
Matrix for embedding quantum dots in a thin film on a cover slide.
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