使用激光扫描共聚焦显微镜的纳米酶谱技术揭示细胞衍生微粒的蛋白水解活性

作者: Aurélien Briens,Maxime Gauberti,Jérôme Parcq,Joan Montaner,Denis Vivien,Sara Martinez de Lizarrondo
机构: 法国卡昂诺曼底大学国家健康与医学研究院(INSERM),西班牙巴塞罗那瓦尔德赫布龙研究所神经血管研究实验室
发布年份: 2016年
更新时间: 2025-04-03 11:19:52
关键词: 细胞外囊泡,磷脂酰丝氨酸,光学成像,纤溶,MPIO,外泌体,炎症
摘要:

细胞衍生微粒(MPs)是由活化细胞释放到细胞外环境中的纳米级囊泡。它们通过携带母细胞的膜锚定和细胞质成分作为生物活性的载体。尽管检测和表征细胞衍生的MPs在许多人类疾病中具有很高的诊断和预后价值,但使用现有方法可靠地测量其大小、数量和生物活性仍然具有挑战性。在本研究中,我们开发了一种使用高分辨率激光扫描共聚焦显微镜直接成像和功能表征MPs的协议。通过将MPs捕获在涂有Annexin-V的微孔上,我们开发了几种使用荧光报告基因的检测方法来测量其大小、检测膜抗原并评估蛋白水解活性(纳米酶谱)。特别是,我们证明了该方法在检测转染细胞系工程化MPs表面组织型纤溶酶原激活剂(tPA)、尿激酶和纤溶酶的抗原和蛋白水解活性方面的适用性和特异性。此外,我们能够使用来自接受溶栓治疗的缺血性中风患者队列的血浆样本和小鼠中凝血酶诱导的缺血性中风实验模型,识别出一部分携带tPA的纤溶性MPs。总体而言,该方法在功能表征细胞衍生的MPs方面具有前景。

结论:
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实验方法及产品解析:
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